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幽門(mén)螺桿菌的生長(zhǎng)、生存和培養(yǎng)條件

更新時(shí)間:2019-05-17  |  點(diǎn)擊率:3975

 

        幽門(mén)螺桿菌是專性微需氧菌,穩(wěn)定生長(zhǎng)需要含2-8%的O2,在大氣和厭氧條件下均不能生長(zhǎng)。從臨床標(biāo)本中分離野生株都必需補(bǔ)充適量的CO2。幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)緩慢,通常需要3-5d或更長(zhǎng)時(shí)間才能形成針尖狀小菌落。許多固體培養(yǎng)基能用作分離培養(yǎng)幽門(mén)螺桿菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,但必需加入適量的全血或胎牛血清。MAX適培養(yǎng)條件為電熱恒溫培養(yǎng)箱37°C和pH7.0-7.2。

        幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是一種專性微需氧菌。它的穩(wěn)定生長(zhǎng)需要依靠在生長(zhǎng)的微環(huán)境中含2-8%的O2。因此,它在大氣中和厭氧條件下均不能生長(zhǎng)。從臨床標(biāo)本中分離野生株都必需補(bǔ)充適量的CO2。

        許多固體培養(yǎng)基能用作分離培養(yǎng)幽門(mén)螺桿菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。例如:腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、布氏瓊脂和M-H瓊脂等。但必需加入適量的全血(馬、羊或人)或胎牛血清作為補(bǔ)充物。加入適量的活性炭(0.2%)或淀粉(1%)亦有利于吸收培養(yǎng)基中衍化產(chǎn)生的毒性氧離子。

        幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)緩慢,通常需要3-5d,甚至更長(zhǎng)時(shí)間,才能形成針尖狀小菌落。為了避免快速生長(zhǎng)的兼性厭O2菌和霉菌等的過(guò)度生長(zhǎng),常需加入由萬(wàn)古霉素、TMP、兩性霉素、多粘菌素等組合的抑菌劑。幽門(mén)螺桿菌在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)更加困難。這可能與在液體里面更難保證菌體周圍穩(wěn)定的微含O2量環(huán)境有關(guān)。

        在血瓊脂中,幽門(mén)螺桿菌不能在含有5%膽汁的情況下生長(zhǎng)。將細(xì)菌暴露于含有5%膽汁的液體培養(yǎng)基中30min,有25%的幽門(mén)螺桿菌被殺死。這說(shuō)明幽門(mén)螺桿菌通過(guò)十二指腸時(shí)尚有生存的可能性。

        有報(bào)告幽門(mén)螺桿菌能在33-40.5°C和pH6.6-8.4條件下生長(zhǎng)。但實(shí)際應(yīng)用中仍以電熱恒溫培養(yǎng)箱37°C和pH7.0-7.2為MAX適條件。幽門(mén)螺桿菌對(duì)低pH比一般細(xì)菌有較強(qiáng)耐受力。電鏡下,甚至偶然可見(jiàn)幽門(mén)螺桿菌鉆入壁細(xì)胞的分泌小管中。Clyne等認(rèn)為酸對(duì)幽門(mén)螺桿菌既有殺傷作用的一面,亦有保護(hù)作用的一面。他們把尿素酶陽(yáng)性的野生株N6和尿素酶陰性的突變株分別接種在含有或沒(méi)有10mmol尿素的兩個(gè)pH范圍從2.2到7.2的37°C  PBS中,30min后然后測(cè)量活菌數(shù)(CFU/ml)、上清液的pH和溶液中的氨量。結(jié)果N6株在沒(méi)有尿素的pH4.5-7.0的PBS中生存良好,甚至在有尿素的起始pH為3.5的溶液中亦能生存。然而野生株和突變株均不能在堿性環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖。存在野生株和尿素的酸性溶液的pH迅速?gòu)?.5升至8.45。尿素酶突變株在pH4.5-7.2的溶液中存活,不對(duì)尿素起反應(yīng)。野生株N6暴露于氨的濃度高達(dá)80mmol仍能存活。胃的酸性環(huán)境可能對(duì)存活于尿素中的幽門(mén)螺桿菌有殺傷作用。但是幽門(mén)螺桿菌決不能存活于含有尿素的正常環(huán)境中,因?yàn)殡S后升高的pH的危害性遠(yuǎn)超過(guò)氨的毒性。

        早期認(rèn)為幽門(mén)螺桿菌并不在代謝中利用碳水化合物獲得能量,而是利用有機(jī)酸和氨基酸。但Reymolds等研制了一種合成培養(yǎng)基證明精氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸是幽門(mén)螺桿菌的必需氨基酸。有一些分離株還需要丙氨酸或絲氨酸。沒(méi)有葡萄糖時(shí),幽門(mén)螺桿菌也不能生長(zhǎng)。有適量葡萄糖和丙氨酸時(shí)能大大促進(jìn)其生長(zhǎng)。這說(shuō)明葡萄糖可能是幽門(mén)螺桿菌能量和碳源的重要來(lái)源之一。幽門(mén)螺桿菌只含有MK-6呼吸醌,不含有所有彎曲菌屬中普遍存在的甲基化MK-6呼吸醌。

幽門(mén)螺桿菌是專性微需氧菌,穩(wěn)定生長(zhǎng)需要含2-8%的O2,在大氣和厭氧條件下均不能生長(zhǎng)。從臨床標(biāo)本中分離野生株都必需補(bǔ)充適量的CO2。幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)緩慢,通常需要3-5d或更長(zhǎng)時(shí)間才能形成針尖狀小菌落。許多固體培養(yǎng)基能用作分離培養(yǎng)幽門(mén)螺桿菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,但必需加入適量的全血或胎牛血清。MAX適培養(yǎng)條件為37°C和pH7.0-7.2。

 

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